1.发情征兆

将大熊猫的发情期分为前期、中期、高峰期三个阶段，收集各种发情征兆和行为等信息。( 表1）针对在2001年至2020年期间在2月～6月里发情并成功交配的10起事例，对雄性和雌性的发情阶段进行了分类。（表2）以交配首日为第0天，回溯了发现各种发情征兆的日期（平均±标准差）。雄性和雌性的发情中期和发情高峰期基本同步，但雌性的发情前期大约出现在交配前1个月，而雄性则出现在交配前2～3个月。

• 表1.发情阶段的分类

  发情阶段		发情征兆和行为
  メス	发情前期	做标记、水浴、阴部1级
  	发情中期	咩叫、对雄性产生兴趣、阴部2级
  		引道黏膜细胞角质形成细胞增加 发情激素水平升高
  	发情高峰期	阴部3级、发情激素水平从峰值下降
  		向雄性示好⇒交配
  雄性	发情前期	做标记、水浴
  	发情中期	咩叫、对雌性产生兴趣
  	发情高峰期	对雌性表现出强烈兴趣、自慰⇒交配

• 表2.各个阶段出现发情征兆的时间

  	发情前期	发情中期	发情高峰期
  雌性	‐20.0±12.2日	ｰ7.6±1.4日	ｰ0.6±0.8日
  雄性	ｰ2~3ヶ月	ｰ6.3±2.0日	ｰ2.4±1.9日

  ※以交配第一天为第0天　n=7

用语说明及补充

• 阴部级别：根据颜色和肿胀情况分为1～3级
• 咩叫：发情期特有的叫声
• 阴道黏膜细胞：本园对排泄在尿液中的细胞进行巴氏染色后，分成蓝色有核细胞、红色有核细胞、无核细胞进行计数
• 发情激素：本园对尿液中雌激素代谢产物之一的雌酮-3-葡糖苷酸（Estron-3-Glucuronide,E1G）的含量进行测定

２.找准交配期

对2020年“良浜”的发情征兆及E1G水平的变化作了汇总（图1），在发情高峰期来临前，确认良浜出现了E1G水平升高、咩叫次数增加、阴部肿胀发红等情况。最终在雌雄大熊猫相互咩叫，雌性做出将臀部朝向雄性并翘起尾巴的示好行为后，让两只大熊猫同居，并成功交配。报告显示大熊猫的排卵期为发情激素水平从峰值急剧下降之时，所以2020年的交配时间也与排卵期相合。Babara 等人（2003）从阴部拭取液中采集细胞，并通过巴氏染色法分为有核嗜碱性、有核嗜酸性及无核角质形成细胞。其报告称在交配前约1周，嗜碱性细胞和嗜酸性细胞交叉，在交配前2 ～3日，角质形成细胞的比例超过其他细胞，可以此有效地事先预测合适的交配期。本园为了减少大熊猫的负担，并未直接从阴道采集阴道黏膜细胞，而是观察随尿液排出的脱落细胞。“良浜”的阴道黏膜细胞变化（图2）显示，在交配前6天和交配前2天，嗜酸性细胞和角质形成细胞分别占据优势，随尿液排出的脱落细胞也表现出相同的结果。

随尿液排出的阴道黏膜脱落细胞（巴氏染色法）

• 

  发情中期（有核嗜碱性细胞和有核嗜酸性细胞）

• 

  发情高峰期（无核角质形成细胞占优）

图1 发情征兆和尿液中E1G水平的变化（2020年 良浜）

图2 尿液中阴道黏膜细胞及E1G的变化（2020年 良浜）

3．交配情况

白浜野生动物园以自然交配为第一优先选择，以实现雄性与雌性发情期的同步化为目标，从冬季开始春季，频繁交换雌性和雄性的运动场地，并让它们嗅闻彼此的排泄物和标记的气味。最终，2001年～2020年共确认到14次交配行为。每次交配均优先考虑自然交配，只有在2001年、2006年、2008年的3次交配行为中，由于尽管雌性持续发情，但雄性对雌性失去了兴趣，才同时采用了人工授精手段。在14次交配行为中，有11次产仔，受胎率高达78.6%。近年来，具有繁殖能力的大熊猫个体的老龄化问题也不断凸显。比如对于雄性大熊猫“永明”，在2016年（24岁）之后，为了保留交配所需的体力，将其与雌性隔着栅栏相见的时间缩到最短，并空出7小时以上的交配间隔，给予其休息的时间。

白浜野生动物园内大熊猫的交配情况